Experimento #2

PUNTO ISOELECTRICO DE AMINOACIDOS Y PROTEÍNAS

Objetivos:     

            Determinar los pKa de un aminoácido polar con carga y un aminoácido no polar, mediante titulación con álcali.

            Estimar el punto isoeléctrico de los aminoácidos polares y no polares del gráfico de pH vs volumen de base.

            Determinar el punto isoeléctrico de una proteína mediante  la técnica de precipitación.

Introducción

Todas las proteínas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en el que se encuentren y de los aminoácidos que la componen, así como de las cargas de cualquier ligando que se encuentre unido a la proteína de forma covalente (irreversible).

Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los radicales libres pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catiónicos, neutros y aniónicos.

Cualquier proteína tendría una carga neta positiva si se encuentra en un medio lo suficientemente ácido debido a que los grupos COOH de los aminoácidos aspártico y

glutámico estarían en su forma neutra pero los grupos amino de Arginina y lysina estarían

protonados (-NH3

+).

De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto estaría cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo estarían desprotonados

(COO-) y los grupos amino estarían en su forma neutra (NH2).

De lo anterior se deduce que las proteínas tienen un pH característico al cual su carga neta es cero. A este pH se le denomina punto isoeléctrico (pI).

Pipeta

Matraz Volumetrico

Pinzas de Bureta

Bureta

Potenciometro

Soporte

 Reactivos

Reactivo	Toxicidad
Acido Glutamico	Medio de contaminación Por ingestión Irritación en la piel Evite el contacto con la piel Cancerígeno No Índice de toxicidad No tóxico Intoxicación por explosión Ninguna
Glicina	Irritación a los ojos: poco irritante Sensibilización: no presenta Toxicidad crónica: no carcinogénico Teratología: no presenta riesgos Reproducción: no tóxico Condiciones agravantes: personas con anemia, enfermedades hepáticas o del sistema nervioso central pueden ser más sensibles a exposiciones excesivas
Acido Clorhídrico	Contacto con la piel: Sin perder tiempo, llevar al sujeto completamente vestido bajo la ducha. Retirar los zapatos, los calcetines, la ropa manchada, lavar la piel alcanzada con agua corriente. Médico de urgencia en todos los casos. Evitar enfriamiento (taparlo con una manta), procurar ropas limpias. Puede efectuarse un lavado posterior con solución de bicarbonato sódico. Contacto con los ojos: Oftalmólogo de urgencia en todos los casos. Prever un transporte urgente hacia un centro hospitalario. Sin perder tiempo, enjuagar los ojos con agua corriente durante 15 minutos, manteniendo los párpados ampliamente abiertos. Administrar un colirio analgésico (oxibuprocaína) en caso de dificultad en abrir los párpados. Ingestión: Médico de urgencia en todos los casos. Prever un transporte urgente hacia un centro hospitalario. Si el sujeto está consciente, hacer enjuagar la boca, dar de beber agua fresca y no provocar el vómito. Si el sujeto está inconsciente, aflojar su cuello y las ropas ajustadas, recostarlo sobre su lado izquierdo en posición lateral de seguridad, reanimación respiratoria y oxígeno en caso necesario. Evitar el enfriamiento (taparlo con una manta).
Hidróxido de Sodio	Inhalación: Corrosivo. Sensación de quemazón, tos, dificultad respiratoria. Piel: Corrosivo. Enrojecimiento, graves quemaduras cutáneas, dolor. Ojos: Corrosivo. Enrojecimiento, dolor, visión borrosa, quemaduras profundas graves
Etanol al 95%	Ojos: Causa irritación. Ingestión: Grandes cantidades pueden causar náuseas y vómito, dificultad para respirar, inconsciencia, daños en el sistema nervioso central. Piel: Puede causar irritación o dermatitis si la exposición es repetida o prolongada. Es irritante para las mucosas, y tejidos en general, ocasionando ulceración, hemorragia y perforación en el tracto digestivo. Tras absorción de grandes cantidades causa borrachera, vértigo, narcosis, parálisis respiratoria.
Éter	Efectos por inhalación: No se conocen efectos toxicológicos causados por este producto. Efectos por contacto con los ojos: No aplicable. Efectos por ingestión: No aplicable. Efectos retardados: No aplicable.

PARTE A :

 PARTE B:                                             

 

                                               

                                                       

 Índice de preinformes:

• Preparación de Soluciones Amortiguadoras 
• Punto Isoelectrico de Aminoacidos y Proteínas 
• Pruebas cualitativas para Aminoacidos y Proteinas 

                                                                                                                                        

Experimento 1

Preparación de Soluciones Amortiguadoras

Objetivos:

• Preparar experimentalmente diferentes soluciones amortiguadoras.

• Determinar el pH de las soluciones anteriormente preparadas.

•  Establecer la relación entre el pH y un amortiguador.

 

Introducción

Una solución buffer o tampón o amortiguadora es una mezcla de un ácido débil y una base débil, la cual se puede obtener mezclando un ácido débil con una de sus sales correspondientes, “tampón ácido”, puesto que el anión del ácido es una base débil. También se puede preparar la solución amortiguadora mezclando una base débil con una de sus sales correspondientes “tampón básico”. El ácido débil reacciona con cual quien cantidad de OH- agregado, mientras que el papel de la base débil es consumir el H+ que pueda haberse introducido

Materiales

Matraz Volumétrico

Balanza

Espátula

Bureta

Vaso Químico

Papel Parafilm

Potenciómetro

Probetas

Reactivos

Reactivos	Toxicidad
Fosfato de potasio Monobásico	Inhalación: Peligroso en caso de inhalación. Puede causar irritación del tracto respiratorio, tos y asfixia. Ingestión: Peligroso en caso de ingestión. La ingestión de grandes cantidades puede causar nausea, vómito, cólicos, diarrea. También pueden presentarse síntomas de envenenamiento por potasio, los cuales pueden incluir ritmo cardiaco lento, colapso vascular periférico con caída de presión arterial, arritmia cardiaca, bloqueo cardíaco, respiración acelerada, debilidad muscular, pesadez en las piernas. Contacto con los Ojos: Peligroso en caso de contacto con los ojos (irritante) Contacto con la Piel: Peligroso en caso de contacto con la piel (Irritante)
Acido Cítrico	Inhalación: Irritación del tracto respiratorio, tos, estornudos y dificultad respiratoria Irritación de la boca y tracto digestivo. Más de 10 gramos pueden causar dolor de estómago y vómito Ingestión: Irritación de la boca y tracto digestivo. Más de 10 gramos pueden causar dolor de estómago y vómito Piel: Irritación Irritación y destrucción de los tejidos. Se puede producir daño severo de la córnea resultando en pérdida de la visión Ojos: Irritación y destrucción de los tejidos. Se puede producir daño severo de la córnea resultando en pérdida de la visión digestivo. El ácido cítrico no se acumula en el cuerpo
Citrato Trisodico	Por contacto ocular: irritaciones leves. Por ingestión: Riesgo de: vómitos, trastornos del equilibrio electrolítico. Quemaduras en esófago y estómago.
Fosfato bibásico de Potasio	Inhalación: Irritaciones en la nariz y tracto respiratorio. Tos y dificultad respiratoria. Contacto con la Piel: Posibles irritaciones. Enrojecimiento y dolor. Contacto con los ojos: Irritaciones. Enrojecimiento y dolor
Hidróxido de Sodio	Inhalación: Corrosivo. Sensación de quemazón, tos, dificultad respiratoria. Piel: Corrosivo. Enrojecimiento, graves quemaduras cutáneas, dolor. Ojos: Corrosivo. Enrojecimiento, dolor, visión borrosa, quemaduras profundas graves
Acido Clorhídrico	Contacto con la piel: Sin perder tiempo, llevar al sujeto completamente vestido bajo la ducha. Retirar los zapatos, los calcetines, la ropa manchada, lavar la piel alcanzada con agua corriente. Médico de urgencia en todos los casos. Evitar enfriamiento (taparlo con una manta), procurar ropas limpias. Puede efectuarse un lavado posterior con solución de bicarbonato sódico. Contacto con los ojos: Oftalmólogo de urgencia en todos los casos. Prever un transporte urgente hacia un centro hospitalario. Sin perder tiempo, enjuagar los ojos con agua corriente durante 15 minutos, manteniendo los párpados ampliamente abiertos. Administrar un colirio analgésico (oxibuprocaína) en caso de dificultad en abrir los párpados. Ingestión: Médico de urgencia en todos los casos. Prever un transporte urgente hacia un centro hospitalario. Si el sujeto está consciente, hacer enjuagar la boca, dar de beber agua fresca y no provocar el vómito. Si el sujeto está inconsciente, aflojar su cuello y las ropas ajustadas, recostarlo sobre su lado izquierdo en posición lateral de seguridad, reanimación respiratoria y oxígeno en caso necesario. Evitar el enfriamiento (taparlo con una manta).

Procedimiento

Parte A: