viernes, 2 de diciembre de 2011






Experimento 9.
Aislamiento del Glucógeno.

Objetivos:
  • Extraer el glucógeno presente en una muestra de hígado de pollo.
  • Caracterizar mediante pruebas químicas el glucógeno extraído

Marco Teórico

El glucógeno es un polisacárido de la célula animal, que se encuentra en el hígado (10%) y músculos (2%).  La estructura del glucógeno y los polisacáridos similares se puede describir como una ramificación en forma de abanico de moléculas de gucopiranosa, por medio de enlaces 1-6 en los puntos de ramificación.

Presenta ramificaciones cada 8-12 glucosas con una cadena muy larga (hasta 300.000 glucosas). Se requiere dos enzimas para su hidrólisis (Glucogenofosforilasa) y alfa (1-6) glucosidasas, dando lugar a unidades de glucosa.  Dado que los seres vivos requieren una parte constante de energía, una parte importante de metabolismo de los azucares esta relacionado con los procesos de formación de almidón y glucógeno y su posterior degradación
 
 
Materiales
 
 
 


Reactivos





Diseño Experimental








Experimento 8
Determinación Cualitativa de Carbohidratos.



Objetivos:

  • Realizar pruebas cualitativas para detectar carbohidratos con base en la formación furfural.
  • Ensayar la prueba para azúcares reductores.
  • Realizar pruebas cualitativas para polisacáridos.


Marco Teórico


Los carbohidratos son compuestos orgánicos, formados primordialmente por carbono, hidrógeno y oxígeno.  Se encuentran en muchos productos naturales y son una de las fuentes principales de energía para los organismos quimiotróficos.
 La unidad fundamental de los carbohidratos son los monosacáridos, estos son polihidroxialdehídos o polihidroxicetonas.

Los monosacáridos se combinan, con la pérdida de moléculas de agua uniéndose mediante enlaces glicosídicos, formándose oligosacáridos y polisacáridos.

En presencia de ácidos  no oxidantes, los carbohidratos se deshidratan y forman  furfural si el monosacárido es una pentosa o hidróximetilfurfural, si el monosacárido es una hexosa.

Cuando la reacción de deshidratación se efectúa con la ayuda del ácido sulfúrico concentrado y el color se desarrolla con alfa naftol, la prueba se denomina reacción de Molisch.

Otra prueba basada en la formación de furfural es la prueba de Seliwanoff.  Esta prueba consiste en la reacción del resorcinol (1,3 dihidróxibenceno) con las cetosas deshidratadas por el HCI concentrado.  Se observa la formación de un complejo rojo.

La prueba de Bial se utiliza para identificar pentosas y consiste en calentar la pentosa con HCI conc. se forma furfural que se condensa con orcinol en presencia de iones férricos para dar un color verde azuloso.

Prueba para azúcares reductores: Las propiedades reductoras de los azúcares depende de la presencia de grupos aldehídos o cetonas, reales o potenciales.  Al calentar ciertas soluciones de azúcares, en presencia de determinados iones metálicos, el grupo carbonilo se oxida y el ión metálico se reduce.

Algunas de éstas pruebas son:  La de Benedict, que identifica carbohidratos en general y es positiva cuando se observa la aparición de un precipitado amarillo, anaranjado o rojo ladrillo; y la prueba de Barfoed, que es similar a la de Benedict, excepto que el reactivo es ligeramente ácido o sirve para detectar la presencia de monosacáridos.

Los polisacáridos son cadenas muy largas o polímeros de monosacáridos, lineales o ramificados.  Se dividen en heteropolisacáridos y homopolisacáridos dependiendo si la forman distintos o iguales unidades simples.

Algunos polisacáridos de reserva importante lo son el almidón formado por dos constituyentes: amilosa y amilopectina; y el glucógeno llamado “almidón animal”, se encuentra en el hígado y músculos.



Materiales





Reactivos





Diseño Experimental




















 





Experimento 7
Estudio de Inhibición de la Fenoloxidasa de la papa

Objetivos:
  • Determinar la actividad enzimática de la fenoloxidasa presente  en extractos de papa.

  • Calcular la Km de la enzima de los datos de actividad enzimática, frente a diferentes concentraciones de sustrato.

  • Estudiar el tipo de inhibición que ejerce el ácido benzoico sobre la actividad de la fenoloxidasa de la papa.



Marco Teórico

Las enzimas son catalizadores muy potentes y eficaces, químicamente son proteínas.  Como catalizadores, las enzimas actúan en pequeña cantidad y se recuperan indefinidamente.  No llevan a cabo reacciones que sean energéticamente desfavorables, no modifican el sentido de los equilibrios químicos, sino que aceleran su consecución.

La característica más sobresaliente de las enzimas es su elevada especificidad.  Esta es doble y explica que no se formen subproductos: (1) Especificidad de sustrato.  El sustrato (S) es la molécula sobre la que el enzima ejerce su acción catalítica. (2) Especificidad de acción.  Cada reacción está catalizada por un enzima específico.

La acción enzimática se caracteriza por la formación de un complejo que representa el estado de transición.

    E       +     S                         ES                         E      +     P

La velocidad de reacción está dada por la ecuación:

Donde V0 es la velocidad inicial del proceso


             V0 =   Vmáx   [S]
                       KM +  [S]




 [S] = concentración de sustrato

 KM  =  constante de Michaelis – Menten

 Vmáx  = velocidad máxima


Los estudios de inhibición enzimática clásica reversible implican el análisis gráfico de los recíprocos de las velocidades iniciales 1/Vo y de las concentraciones de sustrato 1/ [S]


Materiales


  • Baño termométrico
  • tubos de ensayo
  • gradilla
  • bureta de 50 mL
  • goteros
  • pipetas de 5 y 10 mL
  • erlenmeyers de 125 mL
  • gaza
  • embudo buchner
  • licuadora
  • espectrofotómetro visible 







Reactivos





Diseño Experimental